操作和使用方法
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5．漂洗： 加入1 mL 75％乙醇 ，用手指将沉淀块弹起 ，上下颠倒几次，4℃ ，12000 rpm 离心5 min。弃上清 ，75％乙醇不要回流过多，可再短暂离心 ，用移液器将剩余的75％乙醇吸出。
6. 风干 ，溶解： 超净台中自然干燥 5-10 min，不要真空离心干燥， RNA不要完全干透 ，以防不能完全溶解；用DEPC水溶解RNA ，60-65℃助溶 5-10 min 。
7. 定量： 进行Total RNA定量，如果不马上定量 ，将样品贮存于-80℃ 。
RNA定量
我们一般通过Nanodrop紫外分光光度计测定RNA样本在260nm处的吸光值来计算RNA含量。但是 ，DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，其性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的 ，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质 ，不论是核苷 、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性 。所以紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量 。
Nanodrop紫外分光光度计可以得到以下参数：
OD230 ：杂质（酚 、糖原等碳水化合物）的吸光度；
OD260 ：核酸的吸光度；
OD280 ：蛋白质的吸光度；
OD260 /280 ：纯的RNA比值在1.5 ~2.1之间 ，如果比值低 ，表示受到蛋白质的污染；
OD260 /230 ：纯的RNA比值在2.0 ~2.5之间，如果比值低 ，表示受到有机物如糖、肽 、苯酚等的污染。
RNA完整性鉴定
我们一般使用电泳 、Agilent2100等仪器来鉴定RNA的完整
RIN值
RIN（RNA integrity number）代表RNA完整性的数值 ，对total RNA的完整性进行数字化的评估，范围在1 ~10
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评论列表（4条）
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